肠道类器官作为一种高度模拟真实肠道结构和功能的体外模型，已成为研究肠道生理、病理以及疾病机制的重要工具。培养小鼠肠道类器官的过程需要精确控制培养条件和细胞因子的添加，不同阶段需要的细胞因子也不尽相同。
一 初始培养阶段（干细胞增殖）
培养基：基础培养基（如DMEM/F-12）。
生长因子：
Wnt-3a：激活Wnt信号通路，维持干细胞的自我更新。
R-spondin-1：增强Wnt信号，促进干细胞增殖。
EGF（表皮生长因子）：促进细胞增殖。
抑制因子：
Noggin：抑制BMP信号，维持干细胞未分化状态。
二 分化诱导阶段
继续使用DMEM/F-12等基础培养基。
Activin A和FGF2：在分化初期加入，促进定形内胚层的形成。
IL-22：在分化中期加入，促进潘氏细胞的分化。
CHIR99021（GSK3β抑制剂）：用于调控Wnt信号通路，促进细胞分化。
可去除或减少某些增殖因子，如适当降低EGF的浓度，减少对细胞增殖的过度刺激。
三 维持与长期培养阶段
在类器官分化完成后，进入维持与长期培养阶段，此时培养基的调整主要是为了维持类器官的稳定性和功能。
基础培养基：继续使用适合的培养基。
维持因子：根据需要调整Wnt信号通路的激活或抑制，如适当调整Wnt-3a和Noggin的浓度。
去除分化诱导因子：如逐渐减少或去除Activin A、FGF2等分化诱导因子。
四 注意事项
培养基的更换频率：通常每2-3天更换一次培养基，以保证营养成分的充足和代谢废物的清除。
监测类器官状态：定期观察类器官的形态和生长状态，及时调整培养条件。
无菌操作：整个培养过程需严格遵守无菌操作规范，避免污染。
通过上述阶段性的培养基调整，可以有效诱导小鼠肠道类器官的成功分化，并维持其长期稳定培养。Arcegen不但提供上述小鼠肠道类器官培养所需的基础培养基和细胞因子，还提供现成的小鼠肠道类器官培养基套装3DCultr Intestinal Organoid Growth Medium (Mouse)，使用便捷，操作简单，更好助力您的科研之路。
